Annexin V-FITC / PI 細胞凋亡檢測試劑盒

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細胞中，PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的PS由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

檢測原理：

用標記了FITC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-FITC。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，PI能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現(xiàn)紅色。將AnnexinⅤ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-FITC 和PI 結合顯色，而PI 則被排除在活細胞（FITC 陰性）和早期凋亡細胞（FITC 陽性）之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的最后階段會像細胞壞死一樣發(fā)生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被FITC 和PI 結合染色呈現(xiàn)雙陽性。

貝博Annexin V-FITC / PI 細胞凋亡檢測試劑盒可以方便快捷的檢測凋亡細胞，使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。

  產品特點：

● 方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；

● 快速：1小時內即可完成實驗；

● 準確：能準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數各群細胞的比例。

  檢測方法：

流式細胞儀或熒光顯微鏡

  Annexin V-FITC / PI 細胞凋亡檢測試劑盒樣本類型：

● 懸浮細胞

● 貼壁細胞

樣品染色：

1、 離心收集懸浮細胞。離心機300-500g，2-8°C，離心時間5min，棄培養(yǎng)基。

2、 用冷PBS洗滌細胞兩次。（300g，2-8°C，離心時間5min收集細胞）。

3、 用400ul 1X Annexin V結合液懸浮細胞，濃度大約為1 X 106 cells/ml。

4、 在細胞懸浮液中加入5ul Annexin V-FITC染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。

5、 加入5-10ul PI染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。

6、 立即用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。

流式細胞儀分析：

經處理過的細胞此時可以在流式細胞儀上分析。激發(fā)波長為488nm。

按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。

Annexin V-FITC的綠色熒光發(fā)射波長530nm，信號可以通過FL1（FITC接收器）通道檢測；PI紅色熒光在620nm，通過FL2（Propidium iodide接收器）通道或FL3通道檢測。

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