總(TC)檢測(cè)試劑盒2

2-8℃ 避光

開(kāi)蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

微孔板，酶標(biāo)儀

血清、血漿、尿液、細(xì)胞、組織

微孔板，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀//

1.蒸餾水
2.PBS 緩沖液
3.生理鹽水
4.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭

1.試劑盒僅科研使用；
2.樣品含量如超出檢測(cè)范圍上，可用生理鹽水稀釋后檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；
3.試劑中含有防腐劑和穩(wěn)定劑，可能存在一定的刺激作用或毒性，請(qǐng)勿直接接觸皮膚、眼睛。一旦接觸，即用大量清水沖洗。請(qǐng)勿吞服；
4.試劑防止葡萄糖、等試劑的污染；
5.試劑與樣本的用量可按比例改變；

樣品處理
血清、血漿樣本：
從待測(cè)樣本中分理出的血清或血漿不應(yīng)有溶血，直接檢測(cè)，如超過(guò)線性范圍，用生理鹽水稀釋后檢測(cè)；

培養(yǎng)液樣本：
吸取培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清測(cè)定；（一般建議細(xì)胞密度在106/ml以上）

細(xì)胞樣本：
1. 取適量的細(xì)胞(一般推薦>106/ml以上)，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清，留細(xì)胞沉淀。
2. 用0.1mol/L、pH7~7.4 PBS或生理鹽水清洗1~2次，1000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，棄上清，留細(xì)胞沉淀。
3. 加入200~300μl的PBS或生理鹽水勻漿，冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞，功率300W，每次3~5s，間隔30s，重復(fù)3~5次。亦可手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不可離心，待用。也可用裂解液裂解（TrintonX-100，1-2%,裂解30-40分鐘），裂解好的液體不可離心，待用。
【注】：
? 破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎。

組織樣本：
準(zhǔn)確稱取適量組織樣本，按質(zhì)量(g)：體積(ml)=1：9的比例，加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿。2500轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，取上清待用。
【注】：
? 如組織樣本不是高脂肪樣本，勻漿介質(zhì)一般用PBS或生理鹽水；
? 如組織樣本為高脂肪樣本或部分高脂樣本，勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用無(wú)水乙醇。

測(cè)定方法：
酶標(biāo)儀TC測(cè)定操作:
1、 按下表依次加入試劑：
2、 充分混勻, 37℃水浴中孵育10分鐘。
3、 酶標(biāo)儀測(cè)定510nm吸光度。以空白孔調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)孔和各待測(cè)孔的吸光度。

全自動(dòng)上機(jī)操作
計(jì)算：
血清、血漿等液體樣本：
（1）酶標(biāo)儀比色
TC(mmol/L)=｛(樣本孔吸光度-空白孔吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度-空白孔吸光度)｝×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）

（2）
TC(mmol/L)=（樣本管吸光度/校準(zhǔn)管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）

細(xì)胞、組織等樣本：
（1）酶標(biāo)儀比色
TC(mmol/gprot)=｛(樣本孔吸光度-空白孔吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度-空白孔吸光度)｝×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）÷待測(cè)樣本濃度(gprot/L)

（2）
TC(mmol/gprot)= （樣本管吸光度/校準(zhǔn)管吸光度）×標(biāo)準(zhǔn)品濃度（5.17mmol/L）
÷待測(cè)樣本濃度(gprot/L)