天氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測試劑盒2

2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個月

微孔板，酶標(biāo)儀

血清、血漿、細(xì)胞、組織

微孔板，酶標(biāo)儀

1.酶標(biāo)儀
2.離心機(jī)
3.水浴鍋
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.蒸餾水

1.離心管
2.96孔板
3.吸頭
4.一次性手套

1.二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)棄用。
2.由于賴氏法的特點(diǎn)，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時每個點(diǎn)做三管的重復(fù)測定，求出各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度均值，減去“0"號管吸光度均值后，對照賴氏單位繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.血清中AST活性在室溫可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1個月。
4.成批樣本測定時，一般無需每份樣本都做自身血清對照，以試劑空白管代替即可。但對于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進(jìn)行復(fù)測。復(fù)測時，每份樣本都應(yīng)做自身血清對照。
5.嚴(yán)重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會引起測定管吸光度增高，因此檢測該類樣本時應(yīng)做自身血清標(biāo)本對照。
6.當(dāng)樣本的酶活力大于190卡門單位時，應(yīng)將樣本進(jìn)行5-10倍稀釋后再進(jìn)行測定。

準(zhǔn)備樣品：
① 血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，
-20℃保存1個月有效，用于AST/GOT的檢測。
② 細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存1個
月有效，用于AST/GOT的檢測。
③ (選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)
計算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的AST/GOT含量。

制作AST標(biāo)準(zhǔn)曲線：
1. 取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品一支，準(zhǔn)確加入丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1ml，配制成丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品100mM，4℃保存?zhèn)溆谩?br>2. 臨用前，取適量100mM丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液按1：49的比例混合，配制成2mM的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 按下表制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 混勻，向各管中加入二硝基苯肼顯色液20ul，混勻37℃孵育20分鐘后，加入AST顯色基液200μl，混勻。
5. 室溫放置5分鐘，酶標(biāo)儀505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度。各孔吸光度均減去"0"號孔吸光度，所得吸光度差值(縱坐標(biāo))與對應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標(biāo))作圖。

AST酶促反應(yīng)：
1. 按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。
2. AST檢測：混勻，室溫放置5min。酶標(biāo)儀505nm處檢測吸光度，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度值。

計算：
以標(biāo)準(zhǔn)孔活力單位為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測定管吸光度減去對照管吸光度后（A測定-A對照），從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得AST活力單位。

參考范圍：
成年健康人血清AST：8-28卡門單位/ml