細胞核蛋白提取試劑盒

簡要描述：貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

產(chǎn)品型號：
廠商性質：生產(chǎn)廠家
更新時間：2024-07-17
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蛋白質生物學

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貝博® BBproExtra® 細胞核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細胞等動物細胞中提取核蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞核膜組份。

細胞核蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定等蛋白研究。如果下游應用是金屬螯和層析等不能含EDTA試劑的實驗，可以聯(lián)系貝博更換不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物細胞

產(chǎn)品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

細胞核蛋白提取
1.提取液制備：
每200ul冷的蛋白提取液A加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑。每200ul冷的蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制劑混合物和1ul磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。
2.收集細胞。
3.用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4.每20ul細胞壓積（細胞沉淀體積）中加入100-200μl冷的提取液 A，充分吹打混勻，置2-8℃條件振蕩15-30分鐘。
5.再次混勻，然后在4℃，10000×g條件下離心5分鐘。
6.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br/>7.沉淀用PBS洗滌一次，在4℃，5000×g條件下離心5分鐘，棄上清，留沉淀。
8.在沉淀中加入80-200μl冷的提取液B，高速渦旋振蕩15秒。
9.置2-8℃條件振蕩30-40分鐘。
10.在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
11.將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。
12.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br/>

常見問題分析

1.核蛋白濃度低？
核蛋白豐度較低，需要足夠細胞數(shù)量提取，在條件允許的情況下，盡可能加大細胞量。
注意用蛋白提取液B處理時沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑B的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻，至無明顯沉淀。
如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則需要采用超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

參考文獻

1.Pingli Li et al.
Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
Carbohydrate Polymers 2014 （IF=7.182）

2.Guang Yu et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF=6.189）

3.Wan Li et al.
Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
International Journal of Biological Macromolecules 2019 （IF=5.162）

4.Mengjuan Wu et al.
Phosphorylation of SET mediates apoptosis via P53 hyperactivation and NM23-H1 nuclear import
Neurobiology of Aging 2018 （IF=5.117）

5.Xiaoling Ma et al.
Staphylococcal Panton-Valentine Leukocidin Induces Pro-Inflammatory Cytokine Production and Nuclear Factor-Kappa B Activation in Neutrophils
PloS one 2012 （IF=4.411）

6.Jinchun Qian et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 （IF=3.69）

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