革蘭氏陽性菌蛋白提取試劑盒（pull-down、co-IP等）

簡要描述：產(chǎn)品概述 product description

產(chǎn)品型號：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2024-05-09
訪問量：78

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解細(xì)胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學(xué) 查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

Pull-down、co-IP等

適用樣本

革蘭氏陽性菌

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便：不需昂貴設(shè)備。
2.可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3.將蛋白提取的時間縮短至1小時。
4.采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。

產(chǎn)品應(yīng)用

Pull-down、co-IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

1. 提取液的準(zhǔn)備：
根據(jù)所需要提取的樣本量，每500 μl提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑和5 μl蛋白穩(wěn)定液，充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃，10000×g條件下將菌液離心5分鐘，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體。
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。
4. 按每100 mg濕重菌體樣本加入500 μl蛋白提取液，吹打混勻，冰上放置20-30分鐘。
5. 在150-300 w，10 s超聲/10 s間隔條件下冰浴超聲至菌液變清。
6. 在4℃，12000×g條件下將提取液離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。
7. 將上清移入另一干凈離心管，即得革蘭氏陽性菌蛋白樣品。
8. 將總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。部分革蘭氏陽性菌可能較難裂解，進(jìn)行超聲處理。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

參考文獻(xiàn)

1.HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）

2.HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）

3.H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）

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