血液?jiǎn)魏思?xì)胞蛋白提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 單核細(xì)胞蛋白提取試劑盒適用于各種全血樣本中單核細(xì)胞提取總蛋白。提取過程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

產(chǎn)品型號(hào)：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-05-09
訪問量：48

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解細(xì)胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學(xué) 查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物血液

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
2.實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.新鮮全血樣品按下列步驟操作，已提取的單核細(xì)胞樣品從步驟10開始操作。

使用方法

1. 提取液制備：
按需要提取的樣品數(shù)量，每400 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取1.5 ml新鮮抗凝血，靜置吸去上層血漿。
3. 加入1 ml細(xì)胞提取液A，輕輕吹打混勻，冰上靜置5分鐘。過程中適當(dāng)偶爾輕微搖動(dòng)混合均勻。
4. 在4℃，400-500×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細(xì)胞沉淀。
5. 在細(xì)胞沉淀中加入1 ml細(xì)胞提取液A，輕輕吹打混勻。
6. 冰上靜置5分鐘，過程中適當(dāng)偶爾輕微搖動(dòng)混合均勻。
7. 在4℃，400-500×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細(xì)胞沉淀。
8. 在細(xì)胞沉淀中加入400 μl細(xì)胞提取液B，輕輕吹打混勻。
9. 在4℃，1000×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細(xì)胞沉淀。
10. 在細(xì)胞沉淀中加入100-200 μl冷的蛋白提取液C，充分混勻。
11. 在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
12. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到單核細(xì)胞總蛋白。
14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.細(xì)胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用的保護(hù)蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時(shí)間即可。

3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

4.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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