血小板膜蛋白提取試劑盒

簡要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動(dòng)物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。本試劑盒含有的配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

產(chǎn)品型號(hào)：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-05-09
訪問量：64

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解細(xì)胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學(xué) 查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物血小板

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時(shí)間。

使用方法

1．提取液準(zhǔn)備：
每500ul冷的蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
每500ul蛋白溶解液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2．取1-5ml ACD抗凝血，室溫200g離心10分鐘。
3．收集上層血漿，棄下層血液細(xì)胞沉淀。
4．上層血漿室溫3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
5．沉淀中加入500ul 提取液B洗滌一次，3000g離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。
6．沉淀中加入300-500ul冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
7．在4℃，12000g條件下離心10分鐘，取上清。
8．在37℃水浴10分鐘。
9．在37℃， 1000g離心3分鐘。
10．此時(shí)液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50ul液體。
11．用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。
12．將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進(jìn)行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進(jìn)行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時(shí)最后采用低電壓低電流電泳。

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