細菌膜蛋白提取試劑盒

2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

一年

WB,IP等

細菌

1.使用方便，從細菌中提取蛋白不需經(jīng)過超聲破碎等前處理。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
5.本品可用于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
6.本品不含EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應用。

WB,IP等

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

1. 提取液制備：
每500μl冷的提取液A中加入5μl提取液B 和2μl蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 離心收菌體，用PBS洗菌體2次。

3. 按每100-150mg濕重菌體樣本加入500μl冷的提取液A（大約菌體和提取液體積比1:3-1:5，淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩1-2小時，至菌體裂解，液體澄清，菌體沉淀減少。
4. 將菌液在2-8℃低溫下12000×g離心5分鐘，取上清。
5. 在37℃水浴10分鐘。
6. 在37℃， 1000×g離心3分鐘。
7. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50μl液體。
8. 用50-200μl冷的膜蛋白溶解液溶解該溶液，即得細菌膜蛋白樣品。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細胞上樣量。處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

1.Yu-gang Shi, et al.
Multifunctional alkyl ferulate esters as potential food additives: Antibacterial activity and mode of action against Listeria monocytogenes and its application on American sturgeon caviar preservation
Food Control 2019 （IF=4.248）

2.Zhan Huang, et al.
Inhibitory effects and membrane damage caused to fish spoilage bacteria by cinnamon bark (Cinnamomum tamala) oil
LWT 2019 （IF=3.714）

3.XiangTang, et al.
Chromosomal expression of CadR on Pseudomonas aeruginosa for the removal of Cd(II) from aqueous solutions
Science of The Total Environment 2018 （IF=4.61）

4.Xiaolan Wang, Beibei Liu, Yafeng Dou et al.
The Riemerella anatipestifer AS87_01735 gene encodes a nicotinamidase (PncA), an important virulence factor
Applied and environmental microbiology 2016 （IF=4.077）

5.Longwen Xiao, Liang Zhou et al.
Apa is a trimeric autotransporter adhesin of Actinobacillus pleuropneumoniae responsible for autoagglutination and host cell adherence
Journal of Basic Microbiology 2011 （IF=1.585）