酵母核蛋白提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 酵母核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種酵母中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。制備的核蛋白純度高，保持天然活性，絕少交叉污染。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

產(chǎn)品型號(hào)：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-05-09
訪問量：54

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解細(xì)胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學(xué) 查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

酵母

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液制備：
每200μl蛋白提取液D中分別加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 酵母培養(yǎng)物，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗滌酵母兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每100μl體積酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。
5. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集酵母沉淀。
6. 用500μl PBS洗滌酵母一次，離心收集菌體。
7. 酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B，充分混勻。
8. 在37℃或室溫條件下輕微振蕩45-60分鐘。
9. 在1000×g條件下離心5-10分鐘，收集沉淀，棄上清。
10. 用500μl PBS洗滌沉淀。離心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400μl酵母核提取液 C，高速渦旋15秒混勻，然后在振蕩器上振蕩15-30分鐘。
12. 再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，2000×g條件下離心5分鐘，棄上清，留沉淀。
13. 在沉淀中加入200μl冷的核蛋白提取液D，充分混勻。
14. 置振蕩器上振蕩30-40分鐘。
15. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
16. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到酵母核蛋白。
17. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分酵母樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑BC的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
酵母核蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，加大酵母的上樣量。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〥中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過(guò)透析處理或者用脫鹽柱改換過(guò)緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過(guò)超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

4.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對(duì)蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

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