組織線粒體蛋白提取試劑盒

2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

一年

WB,IP等

動物組織

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通1ml玻璃勻漿器勻漿也可，但是線粒體蛋白回收率會下降。

?

1. 提取液準備：
根據(jù)樣本數(shù)量，每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取50-100mg新鮮組織樣本，用刀盡可能剪碎。
3. 用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 加入400μl-500 μl冷的試劑 A，置冰上10分鐘。
5. 用Dounce勻漿器勻漿30-40下。然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。
7. 將上清在4℃，1000×g條件下離心10分鐘。棄沉淀，留上清。
8. 將上清在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入200 μl-400 μl冷的試劑B，輕輕混勻。
10. 在4℃，10000×g條件下離心20分鐘。棄上清，留沉淀。
11. 在沉淀中加入80 μl-150 μl蛋白提取液C，充分混勻。置4℃振蕩20-30分鐘。
12. 在4℃，14000×g條件下離心15分鐘。
13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得線粒體蛋白。
14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>

1.蛋白濃度低？
處理部分線粒體樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑C的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
需要足夠的細胞或組織樣品的上樣量。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

1.Xiao JiangXiao-hui LiaoLi-li, et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019

2. Tao Li, Youtan Liu, Wei Xu, et al.
Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome
Laboratory Investigation 2019

3. JieOuyang, ZhenhuaZeng et al.
SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney Injury Through Elevated Acetylation of SOD2 and p53
Journal of Surgical Research 2019

4. Zhenhua Zeng, Zhongqing Chen, et al.
Polydatin Protecting Kidneys against Hemorrhagic Shock-Induced Mitochondrial Dysfunction via SIRT1 Activation and p53 Deacetylation
Oxidative Medicine and Cellular Longevity 2016

5.Wei Xiong, Shiyuan Xu, et al.
Moderate hypothermia ameliorates enterocyte mitochondrial dysfunction in severe shock and reperfusion
Journal of Surgical Research 2016