膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）

簡(jiǎn)要描述：產(chǎn)品概述 product description 貝博TM BBproExtra® 膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。膜蛋白提取試劑盒可以從細(xì)胞組織樣本中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡(jiǎn)單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。提取的蛋白樣品中不含鹽，可以直接用于等電聚焦、雙向電泳等。如下游實(shí)驗(yàn)不需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，可選用貝博用于Western Blotting、普通蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)的其他試劑盒（相關(guān)產(chǎn)品BB-3103）。

產(chǎn)品型號(hào)：
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時(shí)間：2024-05-09
訪問量：48

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產(chǎn)品分類

CLASSIFICATION

蛋白質(zhì)生物學(xué)

蛋白提取和裂解細(xì)胞器分離蛋白純化蛋白質(zhì)濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學(xué) 查看全部產(chǎn)品

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詳細(xì)介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

有效期

一年

檢測(cè)方法

雙向電泳

適用樣本

動(dòng)物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、使用方便。
2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

雙向電泳

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
? 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?

使用方法

1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個(gè)以上細(xì)胞，在4℃，500g條件下離心3-5分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
或者取50mg-100mg組織樣本，用冷PBS洗干凈，然后用刀盡可能剪碎，加400ul冷的試劑 A，用組織勻漿機(jī)/器勻漿至無(wú)明顯肉眼可見固體。
3. 洗滌后的細(xì)胞樣品中加入400ul冷的試劑 A，充分混勻。
4. 在2-8℃條件下振蕩20-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解，細(xì)胞沉淀明顯減少。
5. 在2-8℃低溫下12000g離心5分鐘，取上清。
6. 在37℃水浴10分鐘。
7. 在37℃， 1000g離心3分鐘。
8. 此時(shí)液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50ul液體。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解該下層液體，即得膜蛋白樣品。
10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑A的處理時(shí)間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

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