改良Lillie-Mayer

室溫避光

1.有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。
2.試劑拆封后請盡快使用完！

6個月

顯微鏡

1. 石蠟切片
2. 冰凍切片
3. 細(xì)胞

1.顯微鏡
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒

1. 4%多聚甲醛
2. 70%乙醇和95%乙醇
3. 酸性乙醇分化液；藍(lán)化液等
4. 如需脫水、透明和封片處理，還需自備二甲苯，中性樹膠或其它封片劑；如樣品是石蠟切片，需自備90%乙醇，無水乙醇以及二甲苯。

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

1. 次使用本試劑時建議先取1-2個樣品做預(yù)實驗。
2. 染色時間根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
3. 以下步驟僅供參考，以實際樣本為準(zhǔn)，或參考文獻(xiàn)。

1. 樣品處理
石蠟切片：
二甲苯中脫蠟10-15分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再脫蠟10-15分鐘。
無水乙醇5分鐘。
90%乙醇2分鐘。
70%乙醇2分鐘。
30%乙醇2分鐘。
蒸餾水2分鐘。


冰凍切片：
回溫后的切片蒸餾水30秒-2分鐘。


培養(yǎng)細(xì)胞：
用4%多聚甲醛固定10分鐘以上。
蒸餾水洗滌2分鐘。
換用新鮮的蒸餾水，再洗滌2分鐘。

2. 蘇木素染色
上述處理好的樣品：
染色5-10分鐘(可以根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時間)。
【注】：
? 冰凍切片滴染1-2分鐘即可。
自來水流水沖洗，去掉多余的染色液，約5-60秒。
蒸餾水再洗滌一遍(數(shù)秒鐘)。
即可直接觀察， 顯微鏡下觀察，細(xì)胞核呈藍(lán)紫色。
（可選步驟）分化、返藍(lán)、伊紅染色等。
如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染，可以參考上述步驟在其它染色完成后直接進(jìn)行蘇木素染色。

3. 脫水、透明、封片或進(jìn)行其它染色
脫水、透明、封片：
95%乙醇脫水2分鐘。
換用新鮮的95%乙醇再脫水2分鐘。
二甲苯透明5分鐘。
換用新鮮的二甲苯，再透明5分鐘。
用中性樹膠或其它封片劑封片。

其它染色：
如果進(jìn)行免疫熒光染色，或進(jìn)行Hoechst等熒光染料的染色，在染色后：
70％乙醇洗滌2次，每次2分鐘。
PBS或生理鹽水或TBS或TBST等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡5分鐘。
然后就可以進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色了。