細(xì)胞耗氧率OCR檢測(cè)方法

耗氧量分析是研究代謝的有用工具。耗氧量測(cè)量結(jié)果是細(xì)胞代謝功能，更具體而言是線粒體功能的關(guān)鍵性指示。通過(guò)這類指標(biāo)來(lái)探究活細(xì)胞代謝，可為細(xì)胞功能以及代謝變化在疾病進(jìn)展中的作用提供深入洞察。

線粒體功能對(duì)細(xì)胞代謝、存活和能量產(chǎn)生至關(guān)重要。線粒體呼吸受損與病理狀態(tài)（如癌癥、缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病）有關(guān)。線粒體毒性也是安全相關(guān)的抗藥性和藥物戒斷癥狀的常見(jiàn)原因。

R01耗氧量分析可以實(shí)時(shí)測(cè)量全細(xì)胞或分離線粒體的耗氧量，是以高通量形式來(lái)評(píng)估用于代謝表征的細(xì)胞呼吸以及評(píng)估治療對(duì)線粒體功能毒性作用的一種可靠方法。它可以使用熒光酶標(biāo)儀在標(biāo)準(zhǔn)微孔板上進(jìn)行有氧代謝的簡(jiǎn)單動(dòng)力學(xué)測(cè)定。隨著呼吸作用的進(jìn)行，溶解氧被消耗，樣品中的氧氣濃度降低，導(dǎo)致R01 分析的信號(hào)增加，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)耗氧量的測(cè)定。

R01是氧氣敏感的熒光探針，最大激發(fā)波長(zhǎng)為 468nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 603nm。其熒光通過(guò)分子碰撞與氧氣反應(yīng)，由O₂淬滅，在無(wú)氧條件下熒光強(qiáng)度更高，反之有氧條件下熒光強(qiáng)度變低，因此熒光信號(hào)的量與樣品中細(xì)胞外O₂的量成反比，從而BBoxiProbe^® R01可被用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞外氧氣消耗的變化。在測(cè)定中，耗氧率由熒光信號(hào)隨時(shí)間的變化計(jì)算。細(xì)胞耗氧量增加，熒光信號(hào)的變化率增加；反之，耗氧量減少，熒光信號(hào)的變化率降低。

R01與O₂的這種反應(yīng)是非破壞性且可逆的， R01沒(méi)有細(xì)胞毒性，其是化學(xué)穩(wěn)定的，惰性的，水溶性的和細(xì)胞不滲透的，不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜。因此還可以同時(shí)與糖酵解， 線粒體膜電位JC-1， ROS和細(xì)胞ATP 、LDH等檢測(cè)的試劑結(jié)合使用，進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè)。

用R01進(jìn)行細(xì)胞外耗氧檢測(cè)方法及其簡(jiǎn)單，不需要適用特殊的儀器設(shè)備，只需要熒光酶標(biāo)儀之類的熒光讀板設(shè)備即可?？梢?/span>用于直接，實(shí)時(shí)分析細(xì)胞呼吸和線粒體功能。適用于測(cè)量各種全細(xì)胞（貼壁和懸浮細(xì)胞），透化細(xì)胞，各種3D培養(yǎng)物，組織，小生物，球體，支架和基質(zhì)等。還適用于分離的線粒體，分離的酶，細(xì)菌，酵母和霉菌等的細(xì)胞外耗氧情況測(cè)量。