細(xì)胞外酸化率（ECAR）檢測(cè)方法

細(xì)胞外酸化（Extracellular Acidification ；ECA）測(cè)量可以為糖酵解（glycolytic）活性研究提供豐富的信息，細(xì)胞外酸化率（ECAR）的檢測(cè)可用于代謝表征并確定具體的干預(yù)措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控）如何影響糖酵解通量。

細(xì)胞代謝與癌癥、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、肥胖、糖尿病及干細(xì)胞等多個(gè)領(lǐng)域息息相關(guān)。糖酵解是真核細(xì)胞中的關(guān)鍵代謝途徑，在分化、增殖和 ATP 生成等生理過(guò)程中起重要作用。糖酵解的改變對(duì)多種疾病也具有重要意義，包括但不限于癌癥、心血管疾病和代謝疾病。

能量代謝指標(biāo)胞外酸化率（ECAR）可幫助研究人員更多地了解細(xì)胞對(duì)外界的應(yīng)激反應(yīng)和運(yùn)作機(jī)制。但以往細(xì)胞代謝的檢測(cè)技術(shù)存在較多限制，例如難以對(duì)細(xì)胞代謝進(jìn)行連續(xù)、實(shí)時(shí)的檢測(cè)；一些專門檢測(cè)細(xì)胞代謝的儀器、硬件貴，試劑耗材消耗成本高，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性低且只能檢測(cè)有限指標(biāo)。

與傳統(tǒng)的終點(diǎn)糖酵解分析不同， 該糖酵解分析可以實(shí)時(shí)測(cè)定細(xì)胞外酸化率  (ECAR)，可以觀察糖酵解機(jī)制的短暫變化和快速反應(yīng)。樣品不需要密封處理，在這些條件下， ECAR 是一種可靠且穩(wěn)定的糖酵解活性測(cè)定方法。

細(xì)胞外酸化率（ECAR）檢測(cè)試劑盒（Extracellular acidification Rate Assay Kit）（BB-48311）是利用合成的酸化檢測(cè)熒光探針 BBcellProbe® P61 來(lái)檢測(cè)細(xì)胞外酸化情況變化的試劑盒?？梢酝ㄟ^(guò)簡(jiǎn)單的混合基于熒光酶標(biāo)儀便捷的直接進(jìn)行細(xì)胞外酸化情況的動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)測(cè)定?？梢詫?shí)時(shí)測(cè)量細(xì)胞糖酵解活性，是以高通量形式來(lái)評(píng)估用于代謝表征的細(xì)胞呼吸以及評(píng)估治療對(duì)細(xì)胞功能毒性作用的一種可靠方法。

它可以使用熒光酶標(biāo)儀在標(biāo)準(zhǔn)微孔板上進(jìn)行簡(jiǎn)單動(dòng)力學(xué)測(cè)定。隨著糖酵解作用的進(jìn)行，丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸，這將導(dǎo)致細(xì)胞外環(huán)境 pH 降低。P61 探針可以靈敏地檢測(cè)到 pH 降低，并表現(xiàn)為 P61 探針熒光信號(hào)增加，從而實(shí)現(xiàn)對(duì) ECAR 的測(cè)定。

P61 最大激發(fā)波長(zhǎng)為 488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為 580nm。其熒光在堿性條件下強(qiáng)度較弱，反之酸性條件下變強(qiáng)，從而 P61 可被用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞外酸化的變化。在測(cè)定中，細(xì)胞外酸化率由熒光信號(hào)隨時(shí)間的變化計(jì)算。細(xì)胞外酸化增加，熒光信號(hào)的變化率增加；反之，酸化減少，熒光信號(hào)的變化率降低。


細(xì)胞酸化檢測(cè)試劑盒可以用于直接，實(shí)時(shí)分析細(xì)胞外酸化情況。本試劑盒可以用來(lái)測(cè)量各種全細(xì)胞（貼壁和懸浮細(xì)胞），各種 3D 培養(yǎng)物，組織，小生物，球體，支架和基質(zhì)等。